芦笋提取物抗癌作用的研究

　　山东省医科院药物研究所 李凤琴 张大锤 曲显俊 王惠 周玲 左春旭

　　提要：芦笋为百合科天门冬属多年生草本植物，为观察其抗癌活性，本文进行了体内、外药效试验。体外用MTT方法(噻唑兰法)测试芦笋提取物对传代细胞系L1210及W256的抑制作用，其IC50分别为1.74和1.13mg生药/ml。另外，还检测了22×10-2、22×10-3、22×10-4mg生药/ml的芦笋提取物对DNA拓扑异构酶I活性的作用，结果提示芦笋提取物有促进酶介导DNA断裂作用。体内试验证实芦笋提取物从10~25×103mg生药/mg的剂量对小鼠S180、小鼠肝癌有明显的抑瘤作用，抑制率分别为43.7%、30.0%、48.0%、50.0%、32.3%、50.1%、47.0%和38.0%，P值均小于0.05。

　　关键词：芦笋提取物 抑瘤作用 拓扑异构酶I MTT法

　　芦笋为百合科天门冬属多年生草本植物，可食用，近年来国内外许多研究证明芦笋用于癌症治疗具有较好的疗效，如陈正玉等曾报道芦笋抗肿瘤作用及对免疫功能的影响。此外，孙含笑等还报道了芦笋有拮抗致突变的作用。本实验是对芦笋提取物的抗癌药效进行研究。

　　一、体外法

　　(一)MTT法 MTT法是利用染料噻唑兰能结合到活性线粒体中，活细胞可使染料还原变色，由颜色来反映活细胞中脱氢酶的活性程序，再用酶联免疫检测仪器O.D值计算IC50和杀伤率达到定量的目的，其量多少与活细胞呈正相关。本试验选用传代细胞系L1210及W256做为芦笋提取物杀伤作用的靶细胞，用MT T法测得的杀伤率，判断芦笋提取物的抑瘤效果。

　　1、材料(略)

　　2、方法 参考Mosmann方法进行。取瘤细胞(L1210、W256)用Hand’s液充分洗涤3次后，接种于40孔板，每孔3×105个细胞/0.2ml，同时各孔分别加入用蒸馏水稀释的1:128、1:256、1:512、1:1024、1:2048的芦笋提取物(剂量分别为8.6mg生药、4.3mg生药、2.1mg生药、1.1mg生药0.54mg生药)，并设MMC阳性对照组(50μg/ml)及空白对照组，每了浓度设四个复孔。培养板置37℃5%CO2培养箱内，温育44小时，每孔加入5mg/ml浓度的噻唑兰液20μl，继续培养4小时，用平板离心机离心后弃上清，每孔加入100μl酸性异丙醇液(Acid Isopropanol，异丙醇中加0.04NHcl，室温避光保存)，充分振荡后室温放置几分钟，使孔内深蓝色结晶完全溶解后，酶联免疫检测仪测570nm和630nm波长的吸光度值(O.D)，计算各孔O.D570—OD630值，根据试验孔与空白孔的OD570-OD650计算杀伤率。 空白对照孔OD570-630-试验孔OD570-630 杀伤率(%)= ×100% 空白对照孔OD570-630 3.结果 上述不同浓度的芦笋提取物对L1210细胞的抑制率分别为100.0%、99.1%、53.0%、14.60%、IC50为1.74±0.11mg生药/ml。对W256细胞的抑制率分别为95.0%、93.0%、90.0%、42.0%、0%、IC50为1.13±0.12mg生药/ml。M MC为77.8%。试验说明芦笋提取物对L1210和W256细胞均有一定程序的杀伤作用。

　　(二)芦笋提取物对DNA拓扑异构酶I活性作用的检测： DNA拓扑异构酶I的主要作用是控制和改变DNA拓扑异构状态，以利于DNA复制和转录。 近来年发现DNA拓扑异构酶I是许多抗癌药物作用的新靶点，尤其是能DNA嵌入的药物常可通过促进该酶介导的DNA断裂反应而起抗癌作用的。 方法与结果 试验用小鼠L1210白血病细胞为提取DNA拓扑异构酶I的材料，从携带pBR322质粒DNA的E.Coil大肠杆菌中提取pBR322DNA做底物。用0.2u拓扑异构酶I与1μgpBR322DNA温孵，同时加入芦笋提取物，其浓度分别为22×10-2、22×10-3、22×10-4mg生药/ml。并设标准管(1μgDNA+0.2u酶)及空白对照管(1μgDNA)。试验重复3次。结果提示芦笋提取物有促进酶介导DNA断裂的作用，且有明显的剂量-效应相关性，从22×10-4mg生药/ml剂量即出现DNA超螺旋带减弱，当剂量增加到22×10-2mg生药/ml时能使DNA超螺旋带完全消失，由此说明芦笋提取物的抗癌作用可能有特异性作用靶点，故有深入研究的价值。

　　二、体内试验(抑瘤试验) 本试验选用三种瘤谱小鼠S180、小鼠肝癌、大鼠W256对芦笋提取物进行抑瘤试验，证实芦笋提取物对小鼠S180、小鼠肝癌有明确的抗癌活性。

　　(一)材料和方法 1.动物来源：昆明种健康小鼠，体重为19~20克，雌雄兼用(每批试验同一个性别)，由我院动物室提供。 2.瘤株来源：小鼠S180、小鼠肝癌、大鼠W256均为腹水型传代。来源于中国医学科学院药物研究所。三瘤株均在本室保种传代三年以上。 3.药物：同体外试验。 4.方法：根据1989年全国第三届肿瘤药理及化疗会议规定的抗癌药筛选规程设计试验。

　　(二)结果与讨论 抑瘤试验表明芦笋提取物对小鼠S180和肝癌有明显抑制使用，对大鼠W256抑制效果不好，现将阳性结果列入表(见附表)。 多次试验及不同给药途径均表明芦笋提取物对小鼠S180、小鼠肝癌有稳定的抑瘤作用，腹腔给药从103~1.9×103mg生药/kg，灌胃给药从9.5×103~25×103mg生药/kg均能获得明显的抑制作用，但剂量-效率关系不明显，并且两种给药途径的有效剂量差距较大。如果能排除药物含量不准确因素，则提示胃肠道吸收不完全，有破坏或有自限性。 体内、外试验结果综合评价芦笋提取物的抗肿瘤活性稳定。

（实习编辑：陈衍）

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